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本试剂盒基于重氮反应比色法，定量检测血清、血浆、组织等样品中的γ-谷氨酰胺转移酶活性。


以萘胺盐为底物，在GGT催化下γ-谷氨酰基转移到甘肽分子上同时释放出游离的α-萘胺，后者与重氮盐反应产生红色化合物，其颜色深浅与GGT浓度呈正比，通过比色法检测530nm处吸光度，进而计算酶的活性。


L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT或γ-GT)是催化γ-谷氨酰基移换反应的酶，γ-谷氨酰基从谷胱甘肽或其他含γ-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上，GGT主要存在于肝细胞膜和微粒体上，参与谷胱甘肽的代谢，血清中主要来自肝胆系统，当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT往往容易增高。

组分	规格	保存
试剂(A):萘胺标准(1.5mmol/L)	1mL	4℃，避光
试剂(B):GGT Assay Buffer	30mL
试剂(C):GGT显色剂	2支	RT
试剂(D):显色稀释液	250mL	4℃

保存：4℃，避光，有效期6个月。


蒸馏水、离心管、水浴锅或恒温箱、比色杯、分光光度计。

• 血清或EDTA抗凝血检测效果较好，肝素钠、柠檬酸、草酸、氟化物等抗凝血会引起浑浊或者抑制酶活性(10～15%)。
  
• 尽量避免使用溶血样品。
  
• GGT活力20~100(U/L)颜色由淡紫红色到紫红色梯度变化。
  
• 本制品仅用于科研领域，不能用于临床诊断或其他用途。

• 准备样品：
  
  • 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃保存，用于GGT的检测。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存，用于GGT的检测。
    
  • (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的GGT含量。
• 配制GGT显色工作液：取GGT显色剂1支，加蒸馏水1mL，充分溶解，即为GGT显色储存液，该GGT显色储存液为过量(4℃保存，30天有效)；临用前按GGT显色储存液∶显色稀释液=1∶1000的比例混合，即为GGT显色工作液，4℃保存，24h有效。
  
• 配制系列萘胺标准：取适量的萘胺标准(1.5mmol/L)，按萘胺标准(1.5mmol/L)∶GGT Assay Buffer=1∶9的比例混合，即为萘胺标准工作液-萘胺标准(0.15mmol/L)，按下表配制系列标准品。
  

  加入物(ml)	0	1	2	3	4	5
  萘胺标准(0.15mmol/L)	0	0.04	0.08	0.12	0.16	0.2
  GGT Assay Buffer	0.2	0.16	0.12	0.08	0.04	0
  相当于GGT(U/L)	0	20	40	60	80	100

• GGT酶促反应：按照下表设置标准管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品的酶活性过高，可减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
  

  加入物(ml)	标准管	对照管	测定管
  蒸馏水	0.02	—	—
  待测样品(如血清等)	—	—	0.02
  系列萘胺标准(1～5号)	0.2	—	—
  GGT Assay Buffer(37℃预温)	—	0.2	0.2
  混匀，37℃准确孵育15min。（标准管不需要孵育）
  GGT显色工作液	2	2	2
  待测样品(如血清等)	—	0.02	—

• GGT测定：混匀，室温放置10min，以“0”号标准管调零，样品测定以“对照管”调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定530nm处标准管、测定管的吸光度。
  
• 计算：以标准管活力单位(U/L)为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，在标准曲线上查出待测样品的GGT酶活力单位。

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